基础检验学/人绒毛膜促性腺激素检查

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成熟女性因受精的卵子移动到子宫腔内着床后,形成胚胎,在发育成长为胎儿过程中,胎盘合体滋养层细胞产生大量的人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG),可通过孕妇血液循环排泄到尿中。当妊娠1-2.5时,血清和尿中的HCG水平即可迅速升高,第8郛周达到高峰,至郛期第4个月始降至中等水平,并一直维持到妊娠末期。(图9-1)

正常妊娠妇女血清中HCG平均值


图9-1 正常妊娠妇女血清中HCG平均值

HCG是由两个非共价键相连的肽链组成的糖蛋白激素。其单个亚基不具有生物活性,当连接成完整化合物时始具活性,分子量约为4.7万。其主要功能就是刺激黄体,有利于雌激素黄体酮持续分泌,以促进了宫蜕膜的形成,使胎盘生长成熟。HCGα亚单位氨基酸排列与黄体生长激素LH)α亚单位相似,故用完整的抗HCG分子抗体测定HCG时与LH间有免疫交叉反应。但它们的β亚单位各不相同。因此为避免交叉反应,目前均采用高将近的抗β-HCG单克隆抗体进持特异的HCG检查,近年来还有报道采用抗β-HCG羧基末端肽单克隆抗体以进一步提高检测的敏感性和特异性。

(一)胶乳凝集抑制试验血凝抑制试验

1960年Wide及Gemzell开始采用胶乳凝集抑制试验(latex agglutinationinhibitiontest,LAIT)技术测定尿中HCG,即将尿液与抗 HCG血清作用后,加入已吸附抗原的胶乳,如尿中含HCG较多,则先与抗 HCG结合,不再有多余的抗 HCG与胶乳产生凝集而仍呈均匀的乳胶状,是为阳性。相反,不含HCG尿不与抗血清作用,当加入吸附抗原的胶乳后,抗血清可与胶乳抗原反应,出现明显的“特”特性凝集颗粒,即为阴性。也可利用血细胞的血凝抑制试验(hemoagglutinationinhibition test,HAIT),其原理与胶乳法一致只是载体由胶乳改成羊红细胞。这两种试验方便简便,灵敏度为100-500Mu/ML,适合大批标本检查,但因特异性差,不能定量,已逐渐被单克隆抗体法所取代。

(二)放射免疫试验(RIA)

利用放射标记的HCG与被检测尿中的HCG竞争性地结合抗-HCG抗体,当被检尿中HCG增加时,结合物放射性减低,与不同含量标准品对比可测尿中HCG的含量。使定量检测成为可能。

由于RIA需一定设备,试验手续繁甭,且有核素污染问题,不适用于临床常规应用。

(三)酶联免疫吸附试验(ELISA)

该方法目前已广泛应用于临床,其基本原理是运用夹心免疫酶分析技术。即采用HCG单克隆抗体包被于固相表面,样品中的HCG都将与支持物表面的抗体相结合。与样品一孵育后,冲洗耳恭听表面,然后加入特异性酶标抗β-HCG亚基的单克隆抗体,最后加入酶作用的基质,即产生颜色。该法可目测,灵感度为20-50Mu/ml,采用抗β-HCG单克隆抗体二点酶免疫法进行定量,灵敏度可达2-10mU/ml。目前免疫酶法进一步发展为更简便、适于病人自检的一步法,即免疫酶渗透试验。

(四)单克隆抗体胶体金试验

免疫胶体金法是将羊抗人HCG抗血清(多抗)、羊鼠IGG分别固定特制的纤维素试带上并呈两条线上下排列,羊抗鼠IGG线在试带知上方为阴性对照,羊抗人HCG多抗在下方为测定。试带条中含均匀分布的胶体金标记鼠抗人β-HCG单克隆抗体和无关的金标记鼠IGG。检测时将试带浸入被检尿液中(液面低于固定的两条抗体线)后迅速取出。尿液沿试带上行,尿中的β-HCG在上行过程中与胶体金标记单克隆抗体结合,待行至羊抗人HCG抗体线时,形成金标记的β-HCG单元抗尿HCG羊抗人HCG复合物而在试带上呈兹红色区带,为HCG阳性反应,试带上无关的金标记鼠IGG随尿液继续上行至羊抗鼠IGG处时与之形成紫红色的金标记的抗原体复合物是为阴性对照。判断结果时,含HCG的尿液试带可显示上、下两条紫红色线条,而阴性标本则只显出上边一条紫红色线。

[方法学评价] 纵观HCG检查方法,有生物激动、化学法、免疫法等。几种不同的HCG检查方法比较见表9-1。免疫法的检测手段不断更新、向特异简便、快速、普及方向发展,现已有胶乳或血凝抑制试剂、放射免疫、酶免疫、胶体金纸片法等。除诊断早期妊娠早孕钉,HCG检查对病理妊娠职宫外孕及胎盘滋养层疾病的诊断、鉴别、治疗及追踪观察等均有意义。

表9-1 几种检查HCG方法的比较

妊娠试验名称 灵敏度(mU/ml或IU/L) 实验条件 应用价值
蟾蜍青蛙)试验(MT) 3000 需合格动物、简便需4-12小时 不能定量已淘汰
胶乳凝集抑制试验(LAIT) 100-500 试剂易得、简便,5min完成 一般早孕,敏感性低不能定量,少用
红细胞凝集抑制试验(HAIT) 100-500 试剂条件要求高2小时完成 敏感性低,少用半定量
放射免疫试验(RIA) <2 要求一定设备,条件要求高2小时完成 试剂可定量,最灵敏,但很少应用
酶联免疫吸附试验(ELISA)过筛法 多种形式,小珠、板、薄片包被,5-15min完成 半定量,灵敏度好广泛应用
夹心酶免疫试验 20-50 试剂,免疫应用板1-3小时可完成 可定量,灵敏度高常应用
免疫胶体金法 10-25 1-15min完成 半定量,灵敏度好广泛应用

[参考值] 妊娠不同时期以及各孕妇之间血清HCG绝对值变化大,一般非孕妇女血HCG<100IU/L,妊娠期间血清HCg 水平见表9-2。

在妊娠最初3个月,HCG水平每(2.2±0.5)天约升高一倍,尿HCG(HCG半定量法)非孕妇女<25IU/L,孕40天>5000IU/L,孕60-70天>(8-32)×104IU/L(清晨尿HCG水平最高,接近血清水平)。

表9-2 妊娠期间血清HCG水平

妊娠周数 HCG(IU/L)
0.2-1 5-50
1-2 50-500
2-3 100-5000
3-4 500-10000
4-5 1000-50000
5-6 10000-100000
6-8 15000-200000
2-3月 10000-100000

[临床意义] HCG的检查对早期妊娠诊断有重要意义,对与妊娠相关疾病、滋养细胞肿瘤等疾病的诊断、鉴别和病程观察等有一定价值。

1.诊断早期妊娠:孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。60-70天可达8万万IU/L,多胎妊娠者尿HCG常于一胎妊娠。

2.异常妊娠与胎盘功能的判断:①异位妊娠:如宫外孕时,本试验只有60%的阳性率,在子燥出血3天后,HCG仍可为阳性,故HCG检查可作为与其它腹症的鉴别。HCG常为312-625IU/L。②流产诊断与治疗:不完全流产如子宫内尚有胎盘组织残存,HCG检查仍可呈阳性;完全流主或死胎时HCG由阳性转阴性,因此可作为保胎或吸宫治疗的参考依据。③先流产:如尿中HCG仍维持高水平多不会发生难免流产。如HCG在2500IU/L以下,并逐渐下降,则有流产的或死胎的可能,当降至600IU/L则难免流产。在保胎治疗中,如HCG仍继续下降说明保胎无将近,如HCG不断上升,说明保胎成功。④在产后4天或人工流产术后13天,血清HCG应低于1000IU/L,产后9天或人工流产术后25天,,血清HCG应恢复正常。如不符合这一情况,则应考虑有异常可能。

3.滋养细胞肿瘤诊断与治疗监测①葡萄胎恶性葡萄胎绒毛膜上皮癌及睾刃畸胎瘤等患者尿中HCG显著升高,右可达10万到数百万IU/L,可用稀释试验诊断如妊娠12周以前1:500稀释尿液呈阳性,妊娠12周以后1:250稀释尿液呈阳性,对葡萄胎诊断有价值。1:100-1:500稀释尿液呈阳性对绒毛膜癌也有诊断价值,如男性尿中HCG升高,要考虑睾刃肿瘤如精原细胞癌、畸形及异位HCG瘤等。②滋养层细胞肿瘤患者术后3周后尿HCG应<50IU/L,8-12周呈阴性;如HCG不下降或不转阴,提示可能有残留病变,这类闰例常易复发,故需定期检查。

4.其它更年期排卵及双侧卵巢切除术均可致黄体生成素升高,因LH与HCG的α肽链组成相同而使采用抗HCG抗体的妊娠试验阳性,此时可用β-HCG的单克隆二点酶免疫测定鉴别。内分泌疾病中如脑垂体疾病、甲状腺功能亢进妇科疾病卵巢囊肿子宫癌等HCG也可增高。近年来发现恶性肿瘤如默契胎瘤、胰腺癌胃癌肝癌乳腺癌肺癌等血中HCG也可升高,因此将HCG看作是癌标志物之一。但必需结合临床情况及其它检查结果综合分析结果综合分析判断。

32 尿液分析仪应用的质量控制 | 排泄物和分泌物检查 32
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