灵芝多糖

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江记灵芝灵芝多糖

灵芝多糖(Ganoderma lucidum Polysaccharide)目前已分离到的有200多种,其中大部分为β –葡聚糖,少数为α –葡聚糖,多糖链由三股单糖链构成,是一种螺旋状立体构形物,其立体构形和DNA、RNA相似,螺旋层之间主要以氢键固定,分子量从数百到数十万,除一小部分小分子多糖外,大多不溶于高浓度酒精,在热水中溶解,大多存在于灵芝细胞内壁。灵芝多糖大多为异多糖,即除含有葡萄糖外,大多还含有少量阿拉伯糖木糖岩藻糖鼠李糖半乳糖等其他单糖。 灵芝多糖在国外亦在进行广泛、深入研究。

[灵芝多糖的医疗保健价值]

灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一,因此,也特别受到医药科技工作者的重视,研究报道也最多。现知灵芝多糖有广泛的药理活性,能提高机体免疫力,提高机体耐缺氧能力,消除自由基,抑制肿瘤、抗辐射,提高肝脏骨髓血液合成DNA、RNA、蛋白质能力,延长寿命,灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。多糖分子量大于1×104时显示强抑制肿瘤活性,活性强弱还与多糖链分叉的程度及支链上羟基的数量有关。对心血管疾病气喘、过敏、神经衰弱胃热等有显著效果,同时还具有降血压、降血脂、解血瘀、改善血液循环皮肤美容等作用。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关。

[灵芝多糖抑制肿瘤3种手段]

1.通过提高机体免疫力,使免疫细胞能在肿瘤发生早期把其杀死、吞噬;

2.提高血小板纤维蛋白的形成能力,大量的纤维蛋白能将早期的肿瘤肿块紧紧包裹,使它与外界隔绝,杜绝肿瘤的营养,从而使它长期处在休眠潜伏状态;

3.降低肿瘤细胞表面电荷,肿瘤细胞表面电荷要比正常细胞高好几倍,表面电荷的降低,肿瘤细胞的分裂调节基因就能启动,从而可抑制肿瘤的无限、快速分裂能力.目前,灵芝多糖已被用作治疗肿瘤的药物之一。  

灵芝多糖的提取方法

一、灵芝菌丝体多糖的提取

(一)材料

1.菌种:湖南省食用菌研究所提供的韩国灵芝母种。

2.种子培养基:玉米粉2% 大米粉2%

蔗糖2% 磷酸二氢钾o.1g

硫酸镁0.05% ph值自然

3.发酵培养基:麦麸浸出液10% 葡萄糖2%

硫酸铵0.2%

磷酸二氢钾0.2% ph值自然

(二)方法

1.种子培养:

2.发酵培养生产菌丝体

3.测定干、湿菌丝体。

将发酵液进行离心,然后取其沉淀物,加人60%蔗糖,进行高速(3000转/分)密度梯度离心5分钟,取上层菌丝体,洗净蔗糖再压干,即得湿菌体,然后再将湿菌体于高温下烘干即为干菌体。分别称取其重量。

4.多糖的提取。

菌丝体预处理。取适量的灵芝湿菌体,用乙醇等有机溶剂进行处理,以除去湿菌体中的脂类物质,同时使糖苷酶失去活性,防止多糖的降解。

(2)用热水提取多糖。取上面经预处理的灵芝湿菌体,放人1:20的热水(95℃)中浸提,一次小时,连续浸提3次,合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积,再用3倍体积的95%乙醇混合,静置10-12小时,再离心,最后加入75%的乙醇反复洗涤,以沉淀多糖。此沉淀物为粗多糖,其中混杂有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质,一般要经过纯化

(3)多糖的纯化,去蛋白质和deae纤维素柱层析。去蛋白质一般采用sevag法:加入0.2倍多糖溶液体积的氯仿和0.04倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离,直至氯仿与水的界面无沉淀为止,且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。多糖纯化一般采用硼酸型deae纤维素柱层析法:取脱蛋白后的多糖,分别以0.025mol/l、0.1mol/l的硼砂,0.1mol/l的氢氧化钠溶液进行洗脱,然后用0.2%恿铜硫酸比色测定吸收度,收集有多糖的洗脱液,再浓缩脱盐即得所需的多糖。

(4)多糖纯度的鉴定。

可用电泳法进行鉴定,如果存在单一带,说明为纯多糖。

5.多糖与多糖中蛋白质含量的测定:

取一定量菌丝体粗多糖,加水煮沸溶解,用sevag方法脱去蛋白考马斯亮兰法测其粗多糖中蛋白质和多糖的含量。测得菌丝体中粗多糖含17.01%、多糖含5.43%、蛋白质含量2.16%。  

灵芝子实体多糖的提取

(一)材料

1.菌种:韩国灵芝栽培种。

2.子实体栽培生产料:木屑78%,米糠20%,蔗糖1%,

石膏1%,ph值自然。

(二)方法

1.子实体栽培。

2.灵芝子实体预处理。

3.子实体多糖的提取。

取适量的灵芝子实体,捣碎成粉末,用80目筛过筛,然后用热水提取法进行提取。具体操作同菌丝体多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白质等小分子杂质,也须除去。

4.去除蛋白质和色素。

子实体粗多糖去除蛋白质也采用se阴法。去除色素,目前尚未发现很理想的方法。一般用乙醇进行反复冲洗,但效果不很理想。

5.多糖纯度的鉴定。

同菌丝体多糖纯度的鉴定。

6.子实体粗多糖、多糖及蛋白质含量的测定。

具体方法同菌丝体多糖及蛋白质含量的测定。测得子实体中粗多糖7.5%、多糖1.5%,蛋白质0.6%,其含量均低于菌丝体中的含量。可见菌丝体阶段就形成了灵芝多糖的有效成分,为灵芝液体深层发酵生产菌丝体提供了科学依据。

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