重组人生长激素

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重组人生长激素

拼音名:Chongzu Ren Shengzhangjisu

英文名:Recombinant Human Somatropin

书页号:2000年版二部-494

本品是由191个氨基酸残基或N端有一甲硫氨酸的192个氨基酸残基组成的蛋白,可加适量赋形剂

稳定剂。含重组人生长激素量应为标示量的90.0%~110.0%。

本品由DNA重组技术生产,必须在生产过程中,用体内生物测定方法测定其生物效价,每1mg蛋白效

价不得少于2.5单位。

重组人生长激素中残余宿主DNA和宿主细胞蛋白为与生产过程相关的、潜在的特异性杂质,必须在生

产过程中严格控制,其限度应符合有关规定。  

目录

性状

本品为白色冻干粉末。  

鉴别

(1)取本品,加水制成每1ml中含2mg的溶液后,加入等体积的样品缓冲液(取浓缩胶缓冲液

2.5ml、20%十二烷基硫酸钠2.5ml、0.1%溴酚蓝溶液1.0ml、87%甘油3.5ml,加水至10ml),再加β-巯基

醇至终浓度为5%,置水浴中3分钟,放冷,作为供试品溶液;另取重组人生长激素对照品或甲酰化重组人生

激素对照品,同法制备,作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各5μl,加至样品孔,照电泳法(附录

Ⅴ F 第五法,银染色)试验,供试品主成分迁移率应与相应的对照品迁移率一致。

(2)在相关蛋白质检查项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与相应的对照品(重组人生长激

素或甲酰化重组人生长激素对照品)的保留时间一致。

(3)取本品适量,用水制成每1ml中含2mg的溶液,取150μl,加三羟甲基氨基甲烷-醋酸缓冲液(取氯

化钙0.294g、三羟甲基氨基甲烷12.11g,加水400ml使溶解,再用5mol/L醋酸溶液调节pH值至8.5,加

水至500ml)150μl、胰蛋白酶溶液[取经TPCK处理的胰蛋白酶适量,用1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液

(pH5.0)制成每1ml中含1mg的溶液]10μl,混匀,置37℃水浴中4小时,加冰醋酸60μl终止反应,作为供试

品溶液;另取重组人生长激素或甲酰化重组人生长激素对照品适量,同法制备,作为对照品溶液。照高效液相

色谱法(附录Ⅴ D)试验,以辛基硅烷键合硅胶为填充剂(5~10μm);以0.1%三氟醋酸溶液为流动相A,

0.1%三氟醋酸的乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱。流速为每分钟1.0ml;柱温为35℃;检测波长

为214nm。

时间 流动相A 流动相B

0分 100% 0%

20分 80% 20%

45分 75% 25%

70分 50% 50%

75分 20% 80%

取对照品溶液和供试品溶液各100μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,供试品的图谱应与对照品

的肽图谱一致。  

检查

相关蛋白质 取本品适量,用0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH7.5)制成每1ml

中含1mg的溶液,作为供试品溶液;另取重组人生长激素或甲酰化重组人生长激素对照品适量,同法制备,

作为对照品溶液。照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定,以丁基硅烷键合硅胶为填充剂(5~10μm);0.05mol/L

三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH7.5)-正丙醇(约为71:29)为流动相,调节流动相中正丙醇比例使人生

长激素主峰保留时间为30~36分钟;流速为每分钟0.5ml;柱温为45℃;检测波长为220nm。取系统适用性

试验用溶液[取重组人生长激素对照品或甲酰化重组人生长激素对照品,用上述三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓

冲液制成每1ml中含2mg的溶液,加过氧化氢溶液使终浓度为0.01%(ml/ml),在4℃放置5小时后,每

1ml加4.5mg的L-甲硫氨酸]20μl注入液相色谱仪,重组人生长激素主峰与氧化的重组人生长激素峰之间

的分离度应符合规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,按面积归一化法计算,总相关蛋白

质含量不得过10.0%。

高分子蛋白质 取本品适量,照含量测定项下方法检查,按面积归一化法计算,高分子蛋白质含量不得

过4.0%。

无菌 取本品,依法检查(附录Ⅺ H 薄膜过滤法),应符合规定。

水分 取本品,照水分测定法(附录Ⅷ M 第一法 A)测定,含水分不得过10.0%。

细菌内毒素 取本品,依法检查(附录Ⅺ E),每1mg重组人生长激素中含内毒素的量应小于5EU。  

含量测定

照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以适合分离分子量为5000~60000球状蛋白的色谱用亲水硅胶为填充

剂;以0.395%碳酸氢铵溶液为流动相;流速为每分钟0.6ml;检测波长为214nm。取系统适用性试验用溶液

(取人生长激素单体-二聚体对照品,用流动相制成每1ml中含1.5mg的溶液)20μl注入液相色谱仪,以人生

长激素单体和二聚体之间的峰谷高与二聚体的峰高之比作为分离度,分离度应不大于0.6。

测定法 取本品,加流动相制成每1ml中含1.0mg的溶液,取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图;另取

重组人生长激素对照品适量,同法则定。按外标法以峰面积计算。  

类别

生长激素类药。  

贮藏

密闭,2~8℃保存。  

制剂

注射用重组人生长激素

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