核糖核酸酶A

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核糖核酸酶A [RNase A]

核糖核酸酶A是内切核糖核酸酶,可特异地攻击RNA上嘧啶残基的3'端,切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶3'磷酸及末端带嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。无辅因子及二价阳离子存在时,核糖核酸酶A的作用可被胎盘RNA酶抑制剂(B1ackburn et al.1977)或氧钒—核糖核苷复合物(Puskas et al.1982)所抑制。

用途

(1)从DNA-RNA或RNA—RNA杂合体中去除未杂合的RNA区。

(2)确定DNA或RNA中单碱基突变的位置(Myers et al.1985,Winter et al.1985)。 在此方法中,RNA-DNA或RNA-RNA杂合体上的单碱基错配可被RNA酶A识别并切割。利用含SP5或T7噬菌体启动子质粒,在体外合成与野生型DNA或RNA互补的32p标记RNA探针,然后与待检含单碱基置换的DNA或RNA退火, 所产生的单碱基错配可用RNA酶A切割,通过凝胶电泳分析切割产物的大小即可确定错配的位置。在所有各种可能的单碱基错配中,大约50%可用此法确定。

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