临床生物化学/诊断分子生物学技术的临床应用

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一种检验方法从建立到临床应用涉及许多因素,关键是临床需要和质量可靠,结果可信、实用二个面。随着对发病机制研究的不断深入,在分子水平诊断、治疗、预后疾病已为人们所认识。分子生物学技术一般操作较复杂,成本较高,质控较差,但它在基因分子水平揭示发病的机制及本质、诊断、治疗疾病的媚力不可抗拒,人们正在努力改进技术以便符合临床要求。如PCR技术的出现,立即得到临床的响应。

一、诊断分子生物学技术应用范围

外源基因侵入致病,如病毒细菌支原体衣原体寄生虫等的传统检验、分类方法效率低,往往不能满足临床要求。而外源致病生物侵入体内发病时,拷贝数较高,样品取材、核酸提取相对容易,加之诊断分子生物学技术的灵敏度与特异性,使临床应用价值提高。特别是病毒致病日益猖獗,临床诊断的不断需要,及应用试剂盒的不断开发,操作手续的不断简化,外源基因的检验方法在临床不断得到应用。该领域的发展趋势很可能成为诊断分子生物学技术在临床应用的突破口,应用前景广阔。

内源性基因诊断目前在遗传性疾病诊断方面应用较多,不断向肿瘤癌基因)及其它领域深入,尚在数据积累,研究阶段。

二、诊断分子生物学技术质量控制

对检验技术的具体要求首先是检验诊断学的质量保证,由完善、合理的实验设计来完成。

⒈特异性杂交技术是通过基因克隆制备探针来完成,PCR是通过引物来完成,RFLP是利用限制内切酶来完成等。即探针、引物、限制性内切酶在反应中都具有特异性。

⒉灵敏度 杂交技术用同位素酶标记探针,PCR反复扩增20-30次都是提高灵敏度的手段。二次PCR、PCR与Southern blot合用都是典型的例子。

⒊操作简单 杂交技术因操作复杂且费时(需1-2天以上出结果),在临床实验室难以推广。而PCR方法相对简单、快速,故推广迅速。

⒋实验成本分子生物学实验因试剂多数依赖进口,成本高,给临床推广造成一定的困难。试剂国产化是今后的努力方向。

重复性和稳定性也是我们关心的问题,但报告较少。

本世纪生命科学飞跃发展,尤其是近年来分子生物学新技术日新月异,使过去难以想象的实验正在进入常规实验室。以基因结构、基因功能研究为基础,已深入到医学研究各领域,在神经分子生物学、肿瘤分子生物学、基因治疗等医学领域做出了引人注目的成绩。分子生物学技术、诊断分子生物学(基因诊断)、基因治疗已经是医学工作者不可回避的课题。分子生物学技术理论深,内容多,应用广。本章只介绍一些基本知识的技术作为入门,更详尽的内容可参考有关专著和资料。

32 核酸一级结构(核苷酸序列sequence)分析 | 临床生物化学分析仪的性能与应用 32
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