凝胶过滤法

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凝胶过滤,英文Gel filtration

凝胶过滤法又称分子排阻法, 这是一种高效分离纯化蛋白质的方法。原理是不同的蛋白质分子对固定化在载体上的特殊配基具有不同的识别和结合能力。选择与待纯化蛋白质具有特殊识别和结合作用的配基,然后应用化学方法将该配基与载体共价链接。将这种有配基的载体装入层析柱中,当含有待纯化的蛋白质溶液通过层析柱时,该蛋白质即与配基发生特异性结合而被吸附在层析柱上,而其他蛋白质则流出柱外。被特异性结合在层析柱上的蛋白质,可以用适当的配体洗脱液洗脱。

缺点:从凝胶过滤的原理可知,蛋白质分子通过凝胶柱的速度(即洗脱体积的大小)并不直接取决于分子的质量,而是它的斯笃克半径,利用凝胶过滤法测定蛋白质分子量时,标准蛋白质(已知分子量和斯笃克半径)和待测蛋白质必须具有相同的分子形状(接近球体),否则不能得到比较准确的分子量。分子形状为线形的或与凝胶能发生吸附作用的蛋白质,则不能用此方法测定分子量。而且柱子成本比较高,整个实验过程耗时很长。

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