临床生物化学/层析技术的原理和分类

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临床生物化学

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(一)层析技术的原理

析法是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。

层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成:一是固定相,它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分;另一是流动相,即可以流动的物质,如水和各种溶媒。当待分离的混合物随溶媒(流动相)通过固定相时,由于各组份的理化性质存在差异,与两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同,在两相中的分配(含量对比)不同,而且随溶媒向前移动,各组份不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组份,随流动相移动时受到的阻滞作用小,向前移动的速度快。反之,与固定相相互作用越强的组份,向前移动速度越慢。分部收集流出液,可得到样品中所含的各单一组份,从而达到将各组份分离的目的。

(二)层析法分类见表16-5~7

(三)层析法的特点与应用

表16-5 按两相所处状态分类

流动相
液体 气体
液体 液-液层析法 气-液层析法
固定相
固体 液-固层析法 气-固层析法

层析法是根据物质的理化性质不同而建立的分离分析方法。根据层析峰的位置及峰高或峰面积,可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用,可检测出层析后各组份的浓度或质量,同时绘出层析图。层析仪与电子计算机联用,可使操作及数据处理自动化,大大缩短分析时间。由于层析法具有分辨率高、灵敏度高、选择性好、速度快等特点,因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析,尤其适用于生物样品的分离分析。近年来,已成为生物化学及分子生物学常用的分析方法。在医药卫生、环境化学、高分子材料、石油化工等方面也得到了广泛的应用。

表16-6 按层析原理分类

名称 分离原理
吸附层析 组份在吸附剂表面吸附固定相是固体吸附剂,各能力不同
分配层析法 各组份在流动相和静止液相(固相)中的分配系数不同
离子交换层析法 固定相是离子交换剂,各组份与离子交换剂亲和力不同
凝胶层析 固定相是多孔凝胶,各组份的分子大小不同,因而在凝胶上受阻滞的程度不同
亲和层析法 固定相只能与一种待分离组份专一结合,以此和无亲和力的其它组份分离

表16-7 按操作形式不同分类

名称 操作形式
柱层析 固定相装于柱内,使样品沿着一个向前移而达分离
薄层层析法 将适当粘度的固定相均匀涂铺在薄板上,点样后用流动相展开,使各组份分离
纸层析法 用滤纸作液体的载体,点样后用流动相展开,使各组份分离
薄膜层析法 将适当的高分子有机吸附剂制成薄膜,以类似纸层析方法进行物质的分离
32 层析技术的应用 | 层析法实验技术 32
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